發布日期:2024-09-26 閱讀量:208
大口徑液氮容器是用于儲存生物樣本,特別是胚胎的理想選擇。這種容器能夠維持極低溫度,通常在-196°C左右,從而確保細胞的活性和完整性。對于生物醫學研究、動物繁育以及醫學治療中的胚胎冷凍保存,大口徑液氮容器提供了必要的技術支持。
液氮容器的類型與選擇
在選擇液氮容器時,主要考慮以下幾個因素:容器容量、材料、冷卻效率和內部結構。通常,東亞牌大口徑液氮容器的容量從10升到50升不等,口徑上從80到200mm均可選。選擇合適的容量取決于待儲存胚胎的數量和大小。以一個常見的20升液氮容器為例,其可儲存約200個胚胎。
容器的材料一般為鋁或不銹鋼,這些材料不僅耐低溫,還具備良好的機械強度。液氮容器內壁應經過特殊處理,以減少液氮的蒸發損失。常見的蒸發率在0.1升/天到0.5升/天之間,具體數值會因使用頻率和環境溫度而異。
儲存步驟
1. 預處理胚胎:在將胚胎放入液氮容器前,需對其進行冷凍保護劑的處理。常用的冷凍保護劑包括甘油(Glycerol)和二甲基亞砜(DMSO)。以甘油為例,濃度通常為10%-20%,這可以有效防止細胞在冷凍過程中形成冰晶,從而保護細胞結構。
2. 冷凍過程:將胚胎置于冷凍管中,好使用具有良好密封性的冷凍管,以防止冷凍保護劑的揮發。將冷凍管放入控制溫度的冷凍儀中,逐漸降低溫度,通常建議以每分鐘1°C的速度降溫至-80°C。此時,細胞內外的水分開始形成冰晶,細胞也逐漸進入休眠狀態。
3. 轉移至液氮容器:當胚胎冷凍到-80°C后,可以轉移到液氮容器中。在轉移時,應確保液氮容器內的溫度保持在-196°C。使用液氮時,要遵循安全規范,佩戴防護手套和護目鏡。同時,避免直接接觸液氮,以免造成凍傷。
4. 儲存監測:液氮容器應定期檢查液氮的液位。液氮的補充應根據蒸發率進行,確保容器內始終保持足夠的液氮。如果液氮水平低于推薦值,可能會導致樣本溫度上升,從而影響胚胎的存活率。
5. 解凍過程:為了復蘇冷凍胚胎,解凍過程同樣重要。將冷凍的胚胎從液氮容器中取出,迅速放入37°C的水浴中,時間控制在1-2分鐘,讓胚胎在短時間內恢復到正常溫度。隨后,將其轉移到含有培養基的培養皿中,觀察其活力和形態變化。
液氮容器的維護
液氮容器的維護至關重要。定期清潔容器內外表面,保持無塵和干燥,以避免污染。在使用過程中,應確保容器蓋子緊閉,避免外部空氣進入,從而減小液氮的蒸發損失。
液氮容器的選購
在選購液氮容器時,推薦選擇知名品牌的產品,如Thermo、MVE、金鳳、東亞牌等。這些品牌的容器一般具有較高的安全性和耐用性。此外,選購時還需注意售后服務和保修政策,以確保長期使用中的問題能夠及時解決。
臨床應用
在不孕不育治療中,胚胎冷凍保存技術被廣泛應用。通過液氮容器保存的胚胎可以在經過一段時間后再次進行植入,提高了妊娠的成功率。根據不同研究,冷凍胚胎的妊娠率與新鮮胚胎相當,甚至在某些情況下更高。